**培养条件**：

气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃；培养基：MEM + 10% FBS + 1% P/S。

**传代方法**：

首次建议以1:2的比例进行传代。当细胞汇合度未超过80%时，建议将培养液放入离心管中，留5ml完全培养基待用，放入37℃、5% CO₂培养箱中进行培养；当细胞密度超过80%时，可以进行传代培养。

**细胞处理流程**：

在细胞达到良好状态后，应将完全培养液灌满并将瓶口封好，以确保细胞在运输过程中的安全。在收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台中遵循严格的无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复状态进行处理。显微镜下需观察细胞的生长情况，并拍摄不同放大倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张），在收货后的前三天照片是重要的售后依据，如未提供照片则默认状态良好。

**细胞传代步骤**：

对于贴壁细胞，首先去除培养上清液，使用不含钙和镁离子的PBS对细胞进行1-2次润洗。接着，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱内消化1-2分钟。在显微镜下观察细胞是否大部分变圆并脱落。若是，迅速将消化液取回操作台，轻拍培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。之后，轻轻吹打使细胞完全脱落，再将悬液转移至15ml离心管中。在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基进行重悬。最后，将细胞悬液按照1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中进行培养。

**悬浮细胞的传代步骤**：

采用半换液法时，将培养瓶竖立静置1小时，轻轻吸去约3ml的培养基，并补充同等量的新鲜完全培养基。对于悬浮细胞，建议在条件允许的情况下进行离心换液法，以提高细胞的生长活力。将细胞悬液收集至离心管中，在1000rpm下离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml新鲜培养基重悬，随后按1:2比例分装入新培养瓶中。

**细胞冻存与复苏**：

在细胞生长到覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞。然后，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态后在终止消化前添加完全培养基进行重悬。最终，将细胞悬液与无血清冻存液（如ag尊龙凯时的产品）混合均匀后加入冻存管中。在-80℃冰箱中存放24小时后，可以转入液氮罐中。

**注意事项**：

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可以将培养瓶内的培养液收集至离心管，经过离心处理后进行适当的重悬再进行传代。务必注意，在进行每一步操作前应做好无菌操作，以确保细胞的安全和健康。